FREQUENCY OF Candida SPECIES IN A TERTIARY CARE HOSPITAL IN TRIANGULO MINEIRO, MINAS GERAIS STATE, BRAZIL / Frequência de espécies de Candida em hospital terciário do Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brasil

Infections by Candida species are a high-impact problem in public health due to their wide incidence in hospitalized patients. The goal of this study was to evaluate frequency, susceptibility to antifungals, and genetic polymorphism of Candida species isolated from clinical specimens of hospitalized patients. The Candida isolates included in this study were obtained from blood cultures, abdominal fluids, and central venous catheters (CVC) of hospitalized patients at the Clinical Hospital of the Federal University of Uberlândia during the period of July 2010 - June 2011. Susceptibility tests were conducted by the broth microdilution method. The RAPD-PCR tests used employed initiator oligonucleotides OPA09, OPB11, and OPE06. Of the 63 Candida isolates, 18 (28.5%) were C. albicans, 20 (31.7%) were C. parapsilosis complex species, 14 (22.2%) C. tropicalis, four (6.4%) C. glabrata, four (6.4%) C. krusei, two (3.3%) C. kefyr, and one (1.6%) C. lusitaniae. In vitro resistance to amphotericin B was observed in 12.7% of isolates. In vitro resistance to azoles was not detected, except for C. krusei. The two primers, OPA09 and OPB11, were able to distinguish different species. Isolates of C. albicans and C. parapsilosis complex species presented six and five clusters, respectively, with the OPA09 marker by RAPD-PCR, showing the genetic variability of the isolates of those species. It was concluded that members of the C. parapsilosis complex were the most frequent species found, and most isolates were susceptible to the antifungals amphotericin B, flucozanole, and itraconazole. High genetic polymorphisms were observed for isolates of C. albicans and C. parapsilosis complex species, mainly with the OPA09 marker.

As infecções causadas por espécies de Candida são problema de grande impacto para a saúde pública, devido à alta incidência em pacientes hospitalizados e como causa de mortalidade. O presente estudo teve como objetivo avaliar a frequência de Candida spp. isoladas de pacientes hospitalizados, assim como a sensibilidade aos antifúngicos e o polimorfismo genético por RAPD-PCR. Os microrganismos incluíram isolados de hemocultura, líquido abdominal e ponta de cateter venoso central de pacientes internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brasil, no período de julho de 2010-junho de 2011. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos foram realizados por microdiluição em caldo e na análise por RAPD-PCR foram utilizados os oligonucleotídeos OPA09, OPB11, e OPE06. Dos 63 isolados, 18 (28,5%) foram C. albicans, 20 (31,7%) C. parapsilosis, 14 (22,2%) C. tropicalis, quatro (6,4%) C. glabrata, quatro (6,4%) C. krusei, dois (3,3%) C. kefyr, e um (1,6%) C. lusitaniae. Resistência in-vitro à anfotericina B foi observada em 12,7% dos isolados. Não foi observada resistência in-vitro aos azólicos, exceto para os isolados de C. krusei. Os oligonucleotídeos OPA09 e OPB11 possibilitaram distinguir diferentes espécies. Isolados de C. albicans apresentaram seis clusters e o complexo C. parapsilosis, cinco clusters, com o iniciador OPA09, por RAPD-PCR, mostrando a variabilidade genética daquelas espécies. Conclui-se que o complexo C. parapsilosis foi a espécie mais frequente, e a maioria dos isolados foi sensível in vitro aos antifúngicos testados. Alto polimorfismo genético foi observado para os isolados de C. albicans e complexo C. parapsilosis, principalmente com o oligonucleotídeo OPA09.

Sensibilidade de isolados de candida spp. a antifúngicos por disco-difusão em ágar e microdiluição em caldo / Antifungal susceptibility of isolates of candida spp. by disk diffusion and broth microdilution

Os testes de sensibilidade aos antifúngicos realizados pelo método de disco-difusão em ágar são práticos e bem conhecidos pelos profissionais do laboratório de microbiologia, entretanto apresentam particularidades que os diferem dos testes realizados para bactérias. O objetivo deste trabalho foi comparar as técnicas de disco-difusão em ágar e microdiluição em caldo na determinação da sensibilidade in vitro de isolados de Candida spp. a antifúngicos. Foram analisados 63 isolados clínicos de leveduras, que incluíram as espécies Candida parapsilosis complex (n = 20), Candida albicans (n = 18), Candida tropicalis (n = 14), Candida glabrata (n = 4), Candida krusei (n = 4), Candida kefyr (n = 2) e Candida lusitaniae (n = 1). As técnicas de disco-difusão em ágar e de microdiluição em caldo foram utilizadas para testar a sensibilidade em relação aos antifúngicos fluconazol, itraconazol e anfotericina B. A sensibilidade ao voriconazol foi determinada somente pela técnica de disco-difusão. Os halos ao redor dos discos de fluconazol variaram de 14 mm a 50 mm, e a CIM de 0,125 µg/mL a 32 µg/mL; para itraconazol, os halos variaram de 9 mm a 27 mm e a CIM de 0,03 µg/mL a 0,25 µg/mL; para anfotericina B, 9 mm a 21mm e 0,5 µg/mL a 2 µg/mL, respectivamente; para voriconazol, o diâmetro dos halos variaram de 19 mm a 50 mm. Para as três espécies, C. albicans, C. parapsilosis e C. tropicalis, a técnica de disco-difusão apresentou boa concordância com a microdiluição, especialmente em relação ao fluconazol, representando, assim, um recurso importante para os laboratórios reportarem os resultados dos testes de sensibilidade dos isolados dessas espécies ao fluconazol.

Antimicrobial susceptibility tests performed by disk diffusion method are practical and well known by professionals that work in the microbiology laboratory. The disk diffusion methodology used to verify the susceptibility of fungi to antifungal agents, however, has characteristics that differ from the tests for bacteria. The objective of this study was to evaluate the disk diffusion method to determine the in vitro susceptibility to antifungal agents of Candida species. We analyzed 63 clinical isolates of yeasts, which included Candida parapsilosis complex species (n = 20), Candida albicans (n = 18), Candida tropicalis (n = 14), Candida glabrata (n = 4), Candida krusei (n = 4), Candida kefyr (n = 2) and Candida lusitaniae (n = 1). The susceptibility tests to antifungal drugs was performed by disk diffusion methods and broth microdilution for antifungal fluconazole, itraconazole and amphotericin B. Voriconazole was used to test the susceptibility only by the disk diffusion method. The inhibition halos of growth around disks of fluconazole ranged from 14 mm to 50 mm and the MIC from 0.125 µg/mL to 32 µg/mL, for itraconazole, halos ranged from 9 mm to 27 mm and the MIC from 0.03 µg/mL to 0.25 µg/mL, for amphotericin B, 9 mm to 21 mm and 0.5 µg/mL to 2 µg/mL, respectively. The diameter of voriconazole disks varied from 19 mm to 50 mm. For the three species, C. albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis, the disk diffusion method showed good agreement with the microdilution, especially to fluconazole, thus representing an important resource for medical laboratories reporting results of susceptibility testing of isolates of these species to fluconazole.